Comenzaremos con la microscopía óptica o fotónica. Cualquier
medio que deje pasar la luz se caracteriza por una constante, llamada n, que
corresponde a índice de refracción, que refleja la velocidad de la luz en ese
medio:
|
Microscopio de Hook |
Donde c es la velocidad de la luz en el vacío y v la
velocidad de la luz en el medio.
Si consideramos dos medios refringentes separados por una
determinada frontera, diremos que tenemos un dióptrio. Por ejemplo, lo
siguiente representa un dióptrio plano:
|
Dióptrico |
También podemos encontrar otras situaciones, como un
dipotrio esférico:
|
Dióptrico esférico |
Una lente son dos dióptrios en sucesión. En el caso simple
de una lente, con sección por la mitad, obtendríamos la sucesión de dos
dióptrios esféricos:
|
Lente convergente |
Construyamos como construyamos la lente, para que funcione,
es indispensable que uno de los dos dióptrios sea esférico. En caso contrario,
obtendríamos una lámina de caras paralelas. Estas también modificarían la
actividad óptica. De hecho, los cubreobjetos, que poseen caras paralelas, deben
tener un grosor fijo de 0,17mm.
Con dos dioptrios curvos podemos también obtener una lente
con el siguiente perfil:
|
Lente divergente |
Con estos dos dioptrios obtenemos lo que se denomina lente
convergente, en l cual los rayos que entran tienden a converger en un puno y lo
que se denomina lentes divergentes, que por si solas no pueden formar una
imagen, necesitan de otra lente asociada y que son las lentes más usadas para
corregir la miopía.
|
Lentes convergente y divergente |
La lente, por perfecta que sea, nunca formará una imagen
perfecta de lo que estamos observando. Siempre hay un error, una deformación.
Se les denomina aberraciones y hay varios tipos. Una aberración bastante
molesta es la aberración cromática, en la cual la luz, al estar compuesta por
varias longitudes de onda y converger en la lente convergente, algunas
longitudes de onda tiende a converger, sobre todo el azul que tiende a
converger en el mismo punto que el rojo, obteniendo muchas imágenes de
distintos colores.
Todos estos problemas de las aberraciones han ido siendo
solucionados en la microscopía óptica. No sucede lo mismo en la microscopía
electrónica.
Las lentes divergentes presentan aberración cromática
inversa a la convergente. Si asociamos ambas lentes, solucionaremos el
problema. Para ello se usan dobletes acromáticos, un sistema sencillo que
combina una lente convergente y una divergente:
|
Doblete acromático |
Más efectivo es el tripleta acromático:
|
Tripleta acromático |
Tanto las lentes como el material que se usa para
prepararlas, así como el material de la propia lente y el perfil de curvatura deben
ser buenos. Cualquier asociación de lentes se puede reducir a una sola lente
equivalente, que funcionaría por si sola como funciona todo el sistema.
Diferenciar una lente convergente de una divergente es
sencilla solo con el tacto, ya que las divergentes son más finas por el centro
que por los extremos y las convergentes son más gruesas por el centro.
Trabajaremos con lentes ideales y cuyo grosor se puede
considerar despreciable frente a su radio de curvatura (es decir, su
superficie). Todos los elementos ópticos de un aparato estarán centrados sobre
el eje óptico de la lente.
|
Lente convergente ideal |
Si hacemos llegar un haz de rayos paralelos a la lente,
estos rayos lo atraviesan y concentran la energía en un punto. Este punto en el
que se concentra la luz es el foco de la lente. Una lente tiene dos puntos
focales. En el caso más simple, están colocados a la misma distancia del
centro. Pero esto solo es cierto cuando los dos medios que rodean la lente son
iguales. Las distancias entre el foco y el eje de la lente se denomina
distancia focal. Si consideramos dos planos perpendiculares al eje óptico que
pasa por los focos, hablaremos de planos focales.
La lente divide el espacio en dos mitades, el lado objeto,
que es donde colocamos el objeto, y el objeto imagen.
Un haz de rayos paralelos converge en el foco solo cuando
los rayos son paralelos al eje óptico. Todos los rayos paralelos,
independientemente de su ángulo, convergen en un solo punto. No tiene porque
ser el foco, pero se encuentra siempre en el plano focal:
|
Plan focal
|
Para saber donde convergen los rayos trazaremos rayos
auxiliares, paralelos a los ejes problema, que pasan por el otro foco de la
lente. Sabemos que el rayo que pase por el foco, será paralelo al eje óptico,
ya que cualquier rayo que pase por el eje óptico, sea cual sea su ángulo,
saldrá de la lente paralelo al eje óptico.
Analizaremos ahora el funcionamiento de las lentes en un
microscopio. Para ello, usaremos los siguientes símbolos:
|
Símbolos ópticos |
Veamos como funciona una lente convergen en función de la
distancia entre el objeto y la lente, colocada esta más allá del foco.
|
Funcionamiento de lentes |
Como vemos la imagen resultante en 1 es invertido respecto
al objeto y de menor tamaño. Cuando nos acercamos al foco, como ocurre en el
esquema 2, vemos que la imagen sigue siendo invertida, pero su tamaño es de
mayor tamaño que el objeto y se va alejando cada vez más de la lente. Según nos
vamos acercando, llega un punto en el que la imagen es del mismo tamaño que el
objeto. Ese punto sería cuando la distancia del objeta será el doble que la
distancia a la lente. La imagen estaría también al doble de la distancia del
foco. De ahí en adelante, como ocurre en el esquema 2, el tamaño de la imagen
resultante es de mayor tamaño que el objeto. De esta forma funcionan los
objetivos de los microscopios o la lente de un proyector de diapositivas.
Pero de todos estos rayos, algunos se cruzaran. Los podemos
proyectar sobre un papel. Se les llama imágenes reales.
Si ponemos el objeto sobre el foco, los rayos que saldrán de
la lente serán paralelos:
|
Lentes: objeto en el foco |
Como son paralelos, nunca se cortan. Y si acercamos el
objeto más a la lente, por delante del foco, los rayos que salen no confluirán,
sino que divergirán. A partir del punto focal, los rayos serán divergentes. No
habrá formación de imagen real y se formarán lo que denominamos imágenes
virtuales. Precisamente en este espacio es como trabajan las lupas o los
oculares de los microscopios. Y es que, si detrás de la primera lente
principal, colocamos una segunda lente, podemos hacer converger los rayos
paralelos. Y en nuestro ojo se encuentra precisamente esa lente: el cristalino:
Cuando el objeto está más cerca del foco, está demostrado
que el objeto que vemos es el mismo que si lanzamos hacia atrás las líneas y
vemos donde convergen. Además, en este caso, no hay inversión de la imagen.
|
Objeto más cerca de la lente que el foco |
Así funciona el microscopio óptico. Son dos grupos de
lentes. El objetivo forma una imagen invertida y de mayor tamaño. Eso es lo que
vemos cuando utilizamos el ocular en forma de lupa.
En el caso del ojo humano, el cristalino es una lente
biconvexa elástica. La curvatura de las caras puede variar. Si variamos el
radio de las caras, variamos la lente. A pesar de que la retina se encuentra
siempre a la misma distancia, gracias a eso, podemos enforcar un objeto desde
una distancia infinita, con el ojo en reposo, hasta una distancia mínima de
unos 25 centímetros. La cifra de 25cm es una medio, pero es imprescindible para
los cálculos a la hora de fabricar objetos ópticos como lupas y microscopios.
El aumento de una lupa viene establecida por la fórmula:
Donde l es la distancia mínima de enfoque y F la distancia
focal de la lente. Válida para el ojo enfocado hacia el infinito. Si el ojo no
está enfocado al infinito, es decir, relajado, hay que sumar una unidad. Y si
una persona posee un defecto y el valor de l es menor de 25, la lente disminuye
se capacidad de aumento.
|
Esquema del funcionamiento de lentes con adicción del cristalino (en rojo) |
Para evitar fatiga ocular, el ojo debe estar enfocado en el
infinito. Para eso, los rayos deben venir paralelos al ojo. Entonces el ocular
deben tener el foco en la imagen intermedia. Ocular y objetivo van montados en
un tubo, de tal manera que no se puede mover la distancia entre las lentes. Hay
que mover la distancia entre la lente y el objetivo para que el sistema
funcione. Entre F1’ y F2 hay un espacio que se llama
Δ
y que es el espacio óptico. Si utilizamos un objetivo con F1 y un ocular con F2
se puede demostrar que el aumento total obtenido viene dado por la siguiente
fórmula:
En esta ecuación, el aumento del ocular vendrá dado por la
fórmula:
Por trigonometría sabemos que:
Y dado que Y’
corresponde al tamaño del objeto que da el objetivo y que Y es el tamaño real
del objeto, podemos concluir que esa fracción corresponde al aumento del
objetivo. En resumen, el aumento total corresponde al producto del aumento del
ocular por el aumento del objetivo:
Los aumentos proporcionales por un objeto óptico no dicen
nada, la difracción condiciona el límite o poder de resolución. Se refiere a la
mínima distancia entre dos puntos del objeto que es capaz de ver el microscopio
como objetos separados.
Debido a la naturaleza ondulatoria de la luz, cuando un rayo
luminoso atraviesa los bordes de un objeto, el rayo fundamental sigue su trayectoria,
pero aparecen rayos en todas las direcciones, originados por difracción.
|
Difracción |
Los rayos secundarios aparecen adelantados o atrasados y son
capaces de producir fenómenos de interferencia, bien de refuerzo o de
atenuación. En el refuerzo, los rayos se encuentran en fase. En la atenuación,
los rayos se encuentran en oposición de fase.
|
Fases: refuerzo y atenuación |
Si en lugar de un borde tenemos un orifico, la situación es
la misma. Si hacemos pasar un haz de luz por u orificio, encontraremos máximos
y mínimos seguidos, que se manifestarán como círculos claros y oscuros
consecutivos. Y hablaremos de un valor de máxima luminosidad en el máximo
central (orden 0) y mínimos consecutivos (que se denominan primer mínimo,
segundo mínimo, etc.). para cada elemento de imagen, el que más participa es el
más luminoso. Los demás poseen muy poca luz.
|
Curva de máxima luminosidad |
Un rango de luz procedente de un punto, al atravesar el
sistema de una lente, se rompe en varios rayos. Y nos forman el espectro de
difracción. A causa de los fenómenos de interferencia, cualquier objeto óptico
es incapaz de hacer que a un punto del objeto le corresponda un punto, sino un
disco de interferencia. Estos discos de interferencia será la unidad en que
estará compuesta la imagen. Se habla de discos de difracción o discos de Azry.
|
Discos de Arzy |
Si nuestra imagen está formada por elementos discoidales,
todas las estructuras más pequeñas que el disco de difracción no se podrán ver.
|
Efecto de los discos de Arzy |
En estas condiciones el objeto de óptica nos está
resolviendo los puntos A y B. Cuando disminuimos las distancias entre A y B
(por ejemplo, el punto B’), se forman discos de difracción tangentes que se van
acercando, hasta que los puntos se acerquen tanto que los discos, a nivel de
imagen, acabarán por superponerse. Y al final llegará un momento en que, a
nivel de imagen, los discos de difracción confluirán. Hemos alcanzado el límite
de resolución del aparato. El límite de resolución se alcanza, pues, cuando dos
discos de resolución llegan a estar a una distancia tal que el centro de una se
encuentra en el borde de la otra, pues si se mueve un poco más, ya no se podrán
distinguir.
|
Sobreposición de discos de Arzy |
El límite de resolución de un aparato de óptica se alcanza
cuando la distancia entre los dos máximos focales es igual al radio del primer
mínimo.
Si nuestra imagen está formada por un mosaico de discos de
Azry, al aumentar mucho, acabaremos viendo los discos de mayor tamaño, pero no
veremos nuevas estructuras. No vemos detalles nuevos. Este es el aumento útil y
se sobrepasa antes de lo que parece. En el microscopio óptico este límite se
supera a partir de unos 500 aumentos. Entramos en lo que se llama aumento
vacío. Se usan más aumentos para que las estructuras pequeñas se vean mejor y
el ojo no se fatigue. El poder de resolución de un microscopio vendrá dado por
la siguiente ecuación:
Donde d es el poder de resolución, que debe ser lo más
pequeño posible (cuanto más pequeño sea el poder de resolución, más aumentos se
pueden conseguir), NA es el número de apertura y
λ
es la longitud de onda. Esta longitud de onda, esta se encuentra entre los 4000
y los 8000 amgstrongs (luz visible).
El significado del número de apertura, NA, está relacionado
con el ángulo de apertura, denominado α. Cuanto más amplio sea,
más resolución tiene el objetivo, porque más pequeños son los discos de
refracción que se producen.
|
Número de Apertura: ángulo alfa |
Entre la muestra y el objetivo hay un medio. El valor final
del número de apertura, NA, vendrá dado por la fórmula:
El valor de NA tiene un problema. A mayor diámetro de la
lente, mayor cantidad de defectos posee la misma. El máximo valor para
objetivos de inmersión es de un NA de 1,3. Es la apertura máxima que podemos
obtener. Si aplicamos lo que conocemos, en el mejor de los casos obtendríamos
un valor de d de 1876,9 amstrongs, o lo que es lo mismo, alrededor de 1,8μm.
La luz ultravioleta tiene una longitud de onda más bajo,
pero no es adecuada, ya que es peligrosa y no es visible. Se fabricaron
microscopios para luz ultravioleta, pero no se usan para observar directamente,
sino para sacar fotografías. Estos consiguen un valor de d de alrededor de 0,18μm.
Sin embargo, estos valores no son reales, ya que el ojo
humano tiene también un poder de resolución, que ronda los 0,1mm,
aproximadamente. Es decir, que realmente el microscopio separará dos puntos
distanciados alrededor de 100μm. Para obtener el valor
real máximo de aumentos, por lo tanto, la fórmula nos dirá que:
Es decir, que un microscopio óptico ideal no irá más allá de
estos alrededor de 550 aumentos. Los objetivos de inmersión permiten un mayor
poder de resolución. Ya que el valor de n del aire es 1, pero el valor de n del
aceite es de 15,15, por lo que el valor de NA en este caso es de 15,15.
Habitualmente, toda esta información vendrá grabada en el
objetivo del microscopio, en el que encontraremos los siguientes números
grabados.
|
Ejemplo de números en el objetivo |
Donde, en este ejemplo, 40 son los aumentos, 0,65 la
apertura, 160 la longitud del tubo y 0,17 el grosor que debe tener el
cubreobjetos.
En cuanto al ocular, este suele estar constituido por dos
lentes. La lente superior debe tener, al menos, el diámetro de la pupila del
ojo. La lente inferior concentrará la luz sobre la lente superior, actuando
como una especie de colector.
|
Ocular |
Imaginemos una superficie del objeto, por ejemplo un
cuadrado de 1
μm de arista. Este dejará pasar
una cierta cantidad de luz. Si lo miramos con 100 aumentos, el cuadrado de 1
μm será vista con una tamaño de 100
μm
de arista. Pero la variación de área es mucho mayor, ya que pasa de 1
μm2 a 10000
μm2. La intensidad de la
iluminación baja y debemos iluminar fuertemente el objeto. De esto se encarga
el condensador.
|
Condensador |
El condensador siempre tiene que estar cerca de la muestra,
de forma que el haz de luz no llegue en males condiciones. De lo contrario, no
llegará con toda su amplitud. El diafragma controlará el paso de luz. Si se
encuentra más cerrado de la cuenta, se darán problemas de refracción, ya que
los rayos que salen del condensador se reflectarán y podremos encontrarnos con
que vemos imágenes superpuestas.
Como ya indicamos, algunos microscopios no usan luz normal
visible, sino otras longitudes de onda. Se han construido microscopios con luz
infrarroja, que tienen muy mala resolución, ya que la longitud de onda de los
rayos infrarrojos es mayor que la de la luz visible. Pero se usan para ver
muestras que con la luz visible son muy opacos, como muestras ricas en melanina.
También se han fabricado microscopias de luz ultravioleta, que convertimos en
luz visible gracias a una placa fluorescente. Se usan fluorocromos, es decir,
sustancias que se excitan con mucha facilidad, se eleva el nivel de energía de
sus electrones, que saltan a niveles energéticos superiores y al perder esa
energía y volver a su estado energético inicial devuelven la energía en forma
de luz, pero en este caso de luz visible en lugar de ultravioleta (es decir,
con una longitud de onda inferior).
Otros microscopios son los interferenciales. Por ejemplo, el
de contraste de fases y el interferencial de Nomarsky. Habitualmente, los
cortes de tejidos usados deben ser muy delgados para que pase la luz. Los
tejidos no suelen tener color propio. En una lámina transparente no podríamos
distinguir elementos ni estructuras. Debemos añadir contraste a la muestra,
para conseguir un contraste en las longitudes de onda, es decir, teñir la
muestra. Pero al teñir la muestra debemos matar a las células. Aunque existen
algunos colorantes vitales, que no matan a las células, estos son escasos y su
uso es muy limitado. Otro sistema para ver células vivas se usan estos
microscopios de contraste. Los distintas partículas del objeto, al chocar
contra ellas la luz, producirán un fenómeno de difracción. En un microscopio
normal, el rayo directo será demasiado grande para que los rayos refractados
ocasionen molestias. El rayo difractado tendrá un retraso de, aproximadamente,
un cuarto de longitud de onda (es decir, 1/4λ).
El microscopio de contraste añade, ópticamente, otro cuarto de longitud de onda
de retraso al rayo principal, de este modo, los rayos normales y los
difractados tendrán un retraso de un medio de longitud de onda (1/2λ). Es el máximo desfase posible. Para conseguir este
desfase se hace pasar por una lámina transparente.
|
Interferencial |
En el condensador, en lugar de un diafragma en forma de
iris, hay un diafragma anular del que sale la luz en forma de anillo.
|
Condensador en anillo de un microscopio interferencial |
Para cada objetivo, debe tener una lámina de fase
incorporada y debe usarse su diafragma anular apropiado.
El microscopio interferencial de Nomarsky es parecido, pero
se usa luz polarizada y tiene ciertas características propias.
Otro tipo de microscopios son los de campo oscuro. Surgieron
en el intento de vencer la barrera de la resolución. Usan una iluminación muy
oblicua. Las partículas muy pequeñas, que no se verían en un microscopia
normal, aparecerán como rayos refractados.
|
Microscopio de campo oscuro |
Veremos un fondo oscuro y las moléculas pequeñas aparecerán
como puntos luminosos. La iluminación oblicua puede obtenerse por varios
mecanismos. Se usan condensadores especiales, que hacen que la luz se proyecte
de forma transversal.
|
Condensador de microscopio de campo oscuro |
El microscopio de polarización es un microscopio normal,
pero con un polarizador entre la fuente de luz y el objeto, con un analizador
en el objetivo. Las partes de la muestra que tengan actividad óptica quedarán
iluminadas, como por ejemplo los granos de almidón o algunas inclusiones de
tipo cristalino.
La solución más habitual para conseguir más aumentos es el
uso del microscopio electrónico. La calidad de las observaciones responde a las
mismas ecuaciones que el microscopio óptico y lo más importante es el límite de
resolución.
Los electrones deben moverse por el vacío, por lo que el
valor de n será siempre 1. La apertura de las lentes electromagnéticas, es
decir, su valor de α, es muy pequeño. Esto hace que,
matemáticamente, el valor de sen α pueda ser sustituido por
el valor de α directamente, ya que el error
que cometemos es muy pequeño. De esta forma, la fórmula puede expresarse de la
siguiente manera:
Para hacer más pequeño el valor de d, hay que variar el
valor de
λ. Y este valor podemos
manipularlo prácticamente a nuestro antojo. Sabemos que la energía de una
radiación electromagnética puede expresarse de dos maneras:
Donde m es la masa del electrón y c su velocidad (extensión
de De Broglie a la ecuación de la luz). Igualando ambos valores podemos deducir
que:
De donde llegamos a la conclusión de que:
Existen dos maneras de expresar la energía cinética:
Donde V es el valor del potencial y e- la carga del
electrón. Sustituyendo el valor de la velocidad que obtuvimos con anterioridad,
igualando las dos ecuaciones y operando se llega a la siguiente expresión:
De lo que se deduce que podemos variar el valor de la
longitud de onda variando el potencial. Los microscopios electrónicos llegan a
potenciales de alrededor de 100 Kv de potencia, con lo que su longitud de onda
sería de alrededor de 0,039 amstrongs. Debemos tener en cuenta que el microscopio
óptico os resolvía a 4000 amstrongs, por lo que podemos ver que la diferencia
en el número de aumentos que se puede conseguir es enorme.
Claro que este valor es teórico, ya que la comparación se
está llevando a cabo con las longitudes de onda, pero con el microscopio
electrónico usaremos otros números de apertura. Y es que el microscopio
electrónico presenta un problema importante de aberración esférica que no se
puede corregir. La aberración esférica surge cuando la lente no es perfecta y
la zona central y la periférica no poseen el mismo foco, con lo que la imagen
se repartirá entre los dos focos más alejados.
Para solucionar este problema debemos eliminar los rayos más
periféricos, dejando pasar solo los rayos más paraxiales, es decir, los
próximos al eje. Pero esto hace que el ángulo
α
se vea reducido. En el microscopio electrónico, con este fin, el ángulo
α ronda los 4.10-3 rad.
|
Control de la aberración esférica |
Para medir la aberración esférica se usa esta fórmula:
Donde K es una constate, f la distancia focal y α el ángulo. Debemos tener en cuenta que el ángulo está
elevado al cubo y que tiene un efecto contrario al que tiene en la fórmula de
la resolución, ya que en este caso se encuentra multiplicando en lugar de
dividiendo. Como ya indicamos, el valor del ángulo óptimo es de 4.10-3 rad, por
lo que:
Y con esto obtendremos valores de resolución teóricos de
unos 2 amstrongs y prácticos de entre 4 y 6 amstrongs. Para estudios
morfológicos estos valores son claramente excesivos, no necesitamos un aumento
tan elevado.
Para calcular el aumento útil y teniendo en cuenta que el
ojo humano resuelve en 0,1mm, tendremos la siguiente fórmula:
Es decir, quinientos mil aumentos. Para materiales
biológicos es un valor excesivo, trabajándose normalmente entre valores de
20000 y 100000 aumentos. A partir de ahí penetramos en estructuras puramente
moleculares, perdiendo información morfológica.
Otro valor que debemos tener en cuenta es la profundidad de
campo. Para comprenderlo, analicemos el esquema.
|
Profundidad de campo |
Mientras el tamaño de los discos sean más pequeños o iguales
que el disco P0 no aparecerán problemas. Esto es lo que se denomina profundidad
de foco, se representa por el valor D y viene dado por la fórmula.
Para el microscopio óptico, este valor D ronda las 5μm. En el microscopio electrónico será mucho mayor. Los
problemas de enfoque serán mayores. Pero el grosor de los cortes no sobrepasará
el valor de 700-800 amstrongs.
La estructura del microscopio electrónico es similar a la de
un microscopio óptico invertido, ya que la fuente de electrones se sitúa
arriba, por debajo encontramos el condensador, el objetivo, que constará de dos
grandes lentes, la intermedia superior y la difractara inferior. Por debajo de
los objetivos encontramos la lente proyectora, que proyecta la imagen sobre la
pantalla fluorescente, que es la parte inferior del microscopio electrónico.
Comenzando por la fuente, esta debe ser un emisor de
electrones. El conjunto se denomina cañón de electrones y su parte emisora está
formada por un filamento de tungsteno (o en general de materiales con poca
afinidad electrónica).
Los antiguos cañones de electrones tenía una estructura
similar a la que se muestra en este esquema.
|
Esquema de un antiguo cañón de electrones |
En el microscopio observamos el emisor de electores, el
ánodo y la lente electromagnética.
En las lentes electromagnéticas, la distancia focal es
función de la intensidad del campo electromagnético y de la intensidad de la
corriente que pasa por el arrollamiento. Esto se resume con la siguiente
fórmula:
Donde DF es la distancia foca, β
el número de vueltas del arrollamiento y NI la intensidad de corriente. Al
aumentar el voltaje aumentamos la intensidad y de esta manera hacemos variar la
distancia focal de la lente. Generalmente hay dos condensadores.
El tipo de cañón del esquema tiene un rendimiento bajo.
Otros sistema más moderno consiste en colocar en los bordes del filamento una
red de resistencia. La caída de potencial hace que la pared o cilindro de hacer
del emisor tenga algo de carga negativo, con lo que los electrones serán
repelidos por esta pared y saldrán por el orificio de salida. Se habla de cañón
influido o polarizado.
|
Cañón influido o polarizado |
El sistema de formación de imágenes es distinto al del
microscopio óptico. Cuando el haz de electrones atraviesa la muestra, algunos
se desvían. Estos no van a pasar a formar parte de la imagen, en el lugar donde
se vean desviados no habrá electrones. Este desvío es llevado a cabo por átomos
pesados. Los materiales biológicos no son ricos en átomos pesados, por eso las
muestras son contrastadas con sustancias ricas en este tipo de átomos, como
derivados del plomo, el uranio o el osmio.
|
Desvío de electrones por metales pesados |
De los apuntes de microscopía de Delio Tolivia, i.m.